Expression and characterization of a Rana pipiens amelogenin protein

Amelogenin, the major protein of developing enamel matrix, controls enamel crystal growth via unique supermolecular features. While much has been contributed to our understanding of mammalian amelogenin function, little is known about how amelogenin and its unique physico-chemical features have evolved among vertebrates. Here we report, for the first time, amphibian amelogenin recombinant protein expression and characterization in Rana pipiens . In order to characterize R. pipiens amelogenin, the newly discovered amelogenin coding sequence was amplified, subcloned, and expressed in Eshcerichia coli . Our newly generated R. pipiens amelogenin-specific antisera resolved a major 19-kDa band on western blots of frog tooth extracts and revealed an enamel organ tissue-specific localization pattern using immunohistochemistry. Using mass spectroscopy, a single major compound with a molecular weight of 21.6 kDa was detected, which corresponded to the amino acid sequence-based molecular weight prediction of the His fusion recombinant protein. Dynamic light scattering studies resolved 41-nm radius subunits compared with 14-nm radius subunits from mouse recombinant amelogenin controls. Transmission electron microscopy revealed defined spherical subunits in R. pipiens matrix self-assembly in contrast with a homogeneous 'stippled' matrix in mouse amelogenin matrix self-assembly. Our data suggest that R. pipiens amelogenin is distinguished from mammalian amelogenins by a number of unique physico-chemical properties which may be related to specific modes of crystal formation in frog enamel.     

Efficacy of a floating sustained release formulation of Bacillus thuringiensis ssp. israelensis in controlling Culex quinquefasciatus larvae in polluted water habitats

Larvicidal efficacy and residual activity of a floating sustained release formulation of Bacillus thuringiensis ssp. israelensis (Bti) was tested in polluted water habitats against Culex quinquefasciatus, the vector of bancroftian filariasis, breeding in cesspools and cesspits. A total of 25 habitats having 65 m(2) water surface area with C. quinquefasciatus immatures were treated with the formulation at the rate of 15 kg/ha. For comparison, in another area, 18 habitats with a water surface area of 70 m(2) were kept untreated. Evaluation was continued up to 179 days with three rounds of Bti application. The mean number of egg rafts did not differ significantly between treated and untreated habitats during the trial period indicating same level of recruitment. However, abundance of larvae and pupae was significantly lower in Bti treated habitats compared to that in untreated ones. The activity of the formulation, with 2 weeks delay in onset compared to treatment, caused >80% reduction in pupal abundance for a period of 30-34 days. Considering this, it is suggested that monthly application of Bti formulation will considerably reduce the recruitment of pupae of C. quinquefasciatus.     

山西省运城市2012年蚊媒病毒的分离鉴定

目的 了解山西省运城市蚊虫及蚊媒病毒的种类和分布。方法 2012年8月在山西省运城市临猗县和永济市采集蚊虫标本, 经鉴定分类和分批研磨后, 利用细胞(C6/36和BHK21)培养方法分离病毒, 对阳性分离物使用蚊媒病毒种属特异引物进行RT-PCR扩增鉴定。结果 采集4属7种10 455只蚊虫, 临猗县和永济市优势蚊种分别为淡色库蚊(91.96%)和三带喙库蚊(72.85%)。经鉴定分析, 从标本中分离到15株基因Ⅰ型乙型脑炎病毒(JEV)、4株库蚊黄病毒(CxFV)、3株淡色库蚊浓核病毒(CppDNV)和1株盖塔病毒(GETV)。结论 首次从山西省分离GETV和CxFV;三带喙库蚊仍是运城市优势蚊种, 目前当地自然循环的JEV仍以基因Ⅰ型为主。     

山东济宁骚扰库蚊对常用杀虫剂的抗性研究

目的 对山东济宁发现的骚扰库蚊进行鉴定,研究其对5种常用杀虫剂的抗性水平。方法 在某小区半地下车库积水中采集库蚊幼虫,对收集到的库蚊进行初步形态学和分子生物学鉴定,确定库蚊的种类。采用幼虫浸渍法研究其对DDVP、残杀威、氯氰菊酯、溴氰菊酯、苏云金杆菌以色列变种(Bti)5种杀虫剂的抗性。结果 采集到的库蚊幼虫是骚扰库蚊,为山东省首次报道,其对DDVP、残杀威、氯氰菊酯、溴氰菊酯、Bti的抗性倍数分别为117.34、53.47、113.50、140.00、2.71。结论 骚扰库蚊作为山东省新出现的蚊种,有必要对其生物学行为和流行病学意义进行深入研究。     

不同品系淡色库蚊各发育阶段的非特异性酯酶和乙酰胆碱酯酶活力变化

研究并探讨非特异性酯酶（NSE）和乙酰胆碱酯酶（AChE）活力在不同品系淡色库蚊（Cules pipiens pallens）各发育阶段的变化，为应用生物化学方法检测蚊虫抗药性及科学合理地进行蚊虫化学防治提供依据。用微量滴定板法测定单个蚊虫NSE和AChE活力，结果显示，敏感品系、DDVP抗性品系和残杀威抗性品系淡色库蚊NSE活力水平在不同发育阶段有变化，I－Ⅲ龄幼虫较低，Ⅳ龄幼虫、蛹和3日龄雌成蚊较高，在各发育阶段均是DDVP抗性品系NSE活力最高，残杀威抗性品系次之，敏感品系最低，其中Ⅳ龄幼虫、蛹和3日龄雌成蚊阶段三个品系间NSE活力差别更明显；三个品系淡色库蚊AChE活力在I－Ⅳ龄幼虫和蛹期较低，3日龄雌成蚊较高，三个品系间AChE活力稍有差异，从高到低依次为残杀威抗性品系、DDVP抗性品系和敏感品系。测定蚊虫NSE活力判断抗药性可选择Ⅳ龄幼虫、蛹和3日龄未吸血雌成蚊；测定蚊虫AChE不敏感性判断抗药性可选择3日龄未吸血雌成蚊；蚊虫化学防治中应选择低龄幼虫阶段施药。     

云南省德宏州2007年和2010年蚊虫及蚊媒病毒调查

目的 调查云南省德宏州蚊虫和蚊媒病毒分布特点。方法 2007年和2010年的7月在德宏州5个县市利用诱蚊灯采集蚊虫标本,采用C6/36和BHK-21细胞分离病毒,RT-PCR和序列分析方法鉴定病毒分离物。结果 共采集到6属29种43 634只蚊虫,其中三带喙库蚊构成比高达78.69%,中华按蚊构成比为14.77%,其他蚊种数量较少。从蚊虫中分离到6株病毒,经RT-PCR和进化分析表明,其中3株为基因Ⅰ型流行性乙型脑炎病毒 （JEV）,均分离自三带喙库蚊;1株盖塔病毒 （GETV） 分离自三带喙库蚊; 2株淡色库蚊浓核病毒 （CppDNV） 分别分离自三带喙库蚊和迷糊按蚊。结论 三带喙库蚊是德宏州优势蚊种和蚊媒病毒主要传播媒介,当地存在基因Ⅰ型JEV、 GETV和CppDNV的流行,并与以往云南省及我国其他地区的分离株有较近亲缘关系。     

新疆艾比湖布尼亚病毒的分离与分子生物学鉴定

目的 发现新疆艾比湖地区潜在流行的蚊媒病毒。方法 采用接种敏感宿主细胞法分离培养病毒;利用反转录聚合酶链和序列聚类分析对病毒株种属进行分子生物学鉴定。结果 从当地优势蚊种凶小库蚊（36.6%）中分离获得一株引起BHK-21细胞病变的病毒,分子生物学鉴定表明该病毒属于布尼亚科正布尼亚属（Orthobunyavirus,Bunyaviridae）成员,暂定名为艾比湖布尼亚病毒。RT-PCR扩增进一步获得长为651 bp和980 bp的病毒基因组S、M节段的部分序列,对上述序列的比对分析显示艾比湖布尼亚病毒与分离自南非的Germiston布尼亚病毒同源关系最为接近,S节段核苷酸和氨基酸序列似然率分别为90.6%和95.0%。M节段变异性高,核苷酸和氨基酸序列似然率仅为78.6%和86.1%。结论 艾比湖布尼亚病毒是国内新发现的一株蚊媒布尼亚病毒。     

首都机场周边2011-2013年三带喙库蚊监测流行病学分析

目的 了解2011－2013年首都国际机场周边三带喙库蚊密度分布情况,为流行性乙型脑炎（乙脑）防控提供科学依据。方法 在机场周边2000 m范围内选取7个监测点,采用国家标准GB/T 23797－2009中的二氧化碳诱蚊灯法,通过描述性研究方法对首都机场周边2011－2013年三带喙库蚊监测数据进行流行病学分析;蚊密度数据比较采用方差分析;使用Pearson秩相关对2013年5－10月三带喙库蚊密度与乙脑发病进行相关分析。结果 3年来共捕获成蚊88 789只,淡色库蚊为优势蚊种,占捕获总数的80.54%,三带喙库蚊占18.89%;2011－2013年三带喙库蚊年平均密度指数分别为4.31、1.62和13.01只/ （灯·h）,差异无统计学意义（F＝1.579,P＞0.05）;3年来,仅8－10月能够捕获三带喙库蚊,月平均密度分别为1.04、32.00和1.15只/ （灯·h）,差异有统计学意义（F＝5.831,P＜0.01）;9月三带喙库蚊密度明显高于8月和10月,其中9月中旬密度最高;7个监测点均有三带喙库蚊捕获,密度在0.44～41.09只/ （灯·h）之间,其中居民区密度最低,温榆河水系密度最高,7个监测点三带喙库蚊密度差异无统计学意义（F＝1.368,P＞0.05）。3年来,仅2013年9－10月首都机场所在地顺义区报告3例乙脑病例,三带喙库蚊密度与乙脑发病呈正相关关系（rs＝0.898,P＝0.015）。结论 首都机场周边三带喙库蚊构成及密度水平均较高,河边等野外环境是其栖息的主要场所,蚊虫活动高峰时间（8－9月）与乙脑疫情的发生时间相一致,蚊密度与乙脑发病呈正相关,应加强对三带喙库蚊的监测工作。     

多杀菌素Natular G30对海南省不同生境致倦库蚊的控制效果比较研究

目的 比较不同剂量多杀菌素Natular G30在生活污水与小型净水中对致倦库蚊海口种群的控制效果,为其在蚊虫控制中的应用提供依据.方法 用海南省海口市生活污水与小型净水中的致倦库蚊幼虫和水,在外环境以减退率为指标,分别测定Natular G30 10、20、40和80 mg/m2对蚊虫的控制效果.试验中,两次测量试验水体的水质pH值、温度、总固体含量、盐度、溶解氧含量.结果 生活污水的pH值、溶解氧含量分别为（9.62±0.43）、（12.79±3.01）mg/L,小型净水分别为（8.91±0.39）、（7.77±3.46）mg/L,二者差异有统计学意义（P＜0.05）.在生活污水中,多杀菌素有效浓度为10和20 mg/m2时,蚊虫控制持效时间为12d,40和80 mg/m2处理的则＞30 d;而在小型净水中,所有4个浓度均有超过30 d的持效期.两种水体所有剂量在第1天对1、2龄期幼虫的减退率即接近100％,3、4龄期幼虫在第3～7天出现100％减退,而蛹在第1天的减退率基本为负值.结论 多杀菌素Natular G30对致倦库蚊幼虫的控制效果具有高效、持久的特点;且对1、2龄幼虫的毒性高于对3、4龄幼虫的毒性,对蛹无明显的毒杀作用.因其在小型净水中的效果优于生活污水,使用时应根据水质调整剂量.     

印度雕蚀菌在三带喙库蚊幼虫体内的发育

对印度雕蚀菌在三带喙库蚊幼虫体内的发育进行了观察，表明１龄幼虫可被真菌所感染，菌体在蚊幼虫血腔内随虫体长大和变态而产生大量孢子囊，即完成其孢子增殖阶段，不再继续发育。孢子囊由死亡腐烂的蚊幼虫体释放于水中，在３４℃下经８—１２ｈ的发育，囊内游动孢子成熟，于适宜条件下经１／２—１ｈ可全部从囊中逸出。游动孢子在水中极为活跃，１ｈ后活力下降，它为感染剑水蚤宿主的感染期。